第二章 综合标准操作规程

第一节 分析性能

一、目的

确保核酸检测实验室检验方法和检验程序能满足临床和患者的需求，确认其符合相应的用途。

二、范围

核酸检测实验室开展的检测项目。

三、职责

1.科室负责人负责方法的验证确认。

2.实验室主任批准方法验证结论。

四、定义

1.检测系统分析性能的验证　对实验室新购置的已被政府有关部门认可其分析性能的检测系统，实验室在投入进行常规患者标本的检测前，需对厂家提供的性能资料中的几个分析性能进行试验以确认该系统是否具有预期的水平。对检测系统分析性能的确认包括精密度、准确度和可报告范围3种性能的评估，对于低值在临床上特别有意义的项目需要增加分析灵敏度性能的评估。

2.检测系统分析性能的确认　性能确认不同于性能验证（表2-1），是对实验室自行开发或研究的新检测系统或检验方法（包括自建检测系统）的分析性能进行确定，包括精密度、准确度、可报告范围、分析灵敏度、分析特异度和生物参考区间等基本性能的实验评价，使其检验结果符合临床要求，以说明检测系统检测结果的可靠性。

3.根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》，引进新的新型冠状病毒核酸检测试剂在用于临床标本检测前，实验室应对由提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证，性能指标包括但不限于精密度（至少要有重复性）和最低检测限。

五、工作程序

（一）检测方法的选择

实验室应采用满足客户需要并适用于所进行的检测工作的方法。当客户所指定的检测方法不合适或已过期时，应通知客户并说明理由。

当客户未指定所采用的方法时，实验室应优先选择标准检测方法。若无标准检测方法，实验室应首先使用在已出版的公认或权威教科书中、经同行评议的书刊或杂志中，或国际、国家或地区的法规中所明确的程序（方法）。如果应用的是内部的规程，则应确认其符合相应的用途并形成文件。

实验室所采用的检测方法应保持最新有效版本，并现行受控。

（二）检测方法的性能评价和确认核实

1.精密度（重复性）性能评价

（1）验证样本准备：

室间质评质控品、厂家或者第三方提供的质控样本。

（2）实验程序

1）批内（重复性）：

2个浓度水平阳性样品，同一批次各重复20次。

2）批间（再现性）：

2个浓度水平阳性样品，每日重复检测4次，连续5天。

（3）实验数据的统计分析和性能评价：

统计实验数据，阳性标本计算CV，CV≤5%符合试剂盒性能要求。

2.检出限

（1）验证样本准备：

使用定值标准物质（国际参考品、国家参考品、厂家参考品），如高于厂家检出限，则用无核酸酶水将其稀释至厂家声明的检出限浓度。

（2）实验程序：

将定值标准物质梯度稀释至厂家声明的检出限浓度，重复测定5次或在不同批内对该浓度样品进行20次重复测定（如测定5天，每天测定4份样本）。

（3）实验数据统计分析和性能分析：

如果是5次重复检测，须达到100%检出率；如为分批次20次检测，至少需要18次检出核酸，或参照试剂盒说明书。

3.方法符合率验证

（1）样本准备：

已经检测过的患者标本、室间质评质控品、厂家或者第三方提供的正确度确认样本等。

（2）实验程序：

采用20个样本（样本包括阴性、弱阳性、强阳性或者不同基因型别），每个样本检测1次。

（3）实验数据统计分析和性能评价：

收集实验数据，将检测结果与外送检测单位结果、室间质评结果或者厂家/第三方机构提供的正确度确认标本进行对比分析，核实该符合率是否为90%。

4.特异性性能评价

（1）样本准备：

已经检测过的临床阴性标本或企业阴性参考品。

（2）实验程序：

采用5个临床阴性标本或企业阴性参考品，每个样本检测1次。

（3）实验数据统计分析和性能评价：

收集实验数据，统计是否有非特异性扩增，阴性符合率是否为100%。

5.抗干扰性能评价

（1）样本准备：

已经检测过的临床阴性标本或企业阴性参考品。

（2）实验程序：

采用5个临床阴性标本或企业阴性参考品，加入其他病原体干扰样本，每个样本检测1次。

（3）实验数据统计分析和性能评价：

收集实验数据，统计是否有非特异性扩增，阴性符合率是否为100%。

六、相关文件及表格

新型冠状病毒核酸检测试剂配制、样本加样、扩增对照表，详见第四章的表4-14。